消毒和滅菌是微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)中最基本的操作技術(shù)，因此從事藥品生產(chǎn)、檢驗(yàn)的人員均應(yīng)了解消毒和滅菌的基本概念、兩者的關(guān)系，各自的應(yīng)用方法及其意義，操作時(shí)應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行相關(guān)的操作規(guī)程，一方面確保生產(chǎn)與檢驗(yàn)工作的效果，另一方面也是對(duì)自身安全的保護(hù)。

消毒和滅菌的概念：

1、消毒：指對(duì)病原微生物的繁殖體的致死作用，但不能殺死芽孢等全部微生物，因此消毒是不徹底的，不能代替滅菌。凡用于消毒的化學(xué)藥品稱為消毒劑，因此人們也常稱消毒劑為化學(xué)消毒劑。

2、滅菌：殺滅物體中所有活的微生物（含芽孢）的作用，滅菌是采用強(qiáng)烈的理化因素使任何物體內(nèi)外部的一切微生物永遠(yuǎn)喪失其生長繁殖能力的措施。通常用物理方法來達(dá)到滅菌的目的。

二、消毒和滅菌的關(guān)系

1、共性：殺滅微生物以控制其污染和防止傳播。

2、區(qū)別：

三、消毒和滅菌的應(yīng)用

1、消毒

1）消毒劑分類

依殺滅微生物能力進(jìn)行分類，有以下三種：

2）消毒劑的選擇

消毒劑的種類很多，性質(zhì)不一，因此應(yīng)根據(jù)實(shí)際需求選擇既安全又有效的消毒劑。在選擇時(shí)至少應(yīng)考慮以下幾點(diǎn)：

3）消毒劑的使用

A、影響消毒效果的因素

影響消毒劑效能的因素比較復(fù)雜，一般都因消毒劑的種類而異，因此各種消毒劑使用時(shí)應(yīng)注意以下因素

a）微生物種類及數(shù)量

消毒劑的有效濃度及作用時(shí)間因微生物的種類及數(shù)量的不同而有差異，不同類型的病原微生物對(duì)消毒劑的抗力不同。對(duì)于細(xì)菌繁殖體來說，革蘭氏陰性菌比革蘭氏陽性菌對(duì)消毒劑的耐受性強(qiáng)，尤其是銅綠假單胞菌的耐受性較強(qiáng)；芽孢的耐受力最強(qiáng)，在化學(xué)消毒劑中，戊二醛和過氧乙酸可殺滅芽孢，但其作用力不如熱力滅菌方法；病毒對(duì)消毒因子的耐力也因其種類的不同而有相當(dāng)大的差異，親水病毒的耐力較親脂病毒要強(qiáng)；真菌對(duì)大多數(shù)化學(xué)藥物的耐受力較強(qiáng)，因此適用于細(xì)菌的消毒劑并不一定適用于真菌，但真菌一般耐熱性較差。微生物污染數(shù)量多時(shí)，應(yīng)加長消毒接觸時(shí)間、加大消毒劑用量或提高消毒劑濃度。

b）溫度

一般來說，消毒的速度隨溫度的提高而加快，其殺菌作用也相應(yīng)增強(qiáng)。溫度影響的原理是其可影響菌體表面和酶系統(tǒng)的活性，以及消毒劑的分子運(yùn)動(dòng)，使得消毒劑與菌細(xì)胞接觸的機(jī)會(huì)增加，從而使消毒的時(shí)間縮短。但溫度的變化對(duì)各種消毒劑的影響不同，如醇類和酚類一般受溫度影響較小，但如甲醛、環(huán)氧乙烷等溫度升高一倍時(shí)，其殺菌效果可增加十倍。

c）濃度

消毒劑的濃度應(yīng)考慮的是其主要成分的濃度，根據(jù)不同類型的消毒劑性質(zhì)，提高或降低濃度，均可顯著影響消毒效果。一般降低消毒劑的濃度需延長相應(yīng)的消毒時(shí)間，且消毒劑內(nèi)的有效成分在其保存期內(nèi)也會(huì)相應(yīng)下降。

d）pH值

酸堿度常影響酸性或堿性消毒劑的電離度，改變其溶解度及分子結(jié)構(gòu)，影響不同離子型消毒劑的作用，在堿性環(huán)境中，細(xì)菌表面負(fù)電荷增多，陽離子型消毒劑作用較強(qiáng)，在酸性環(huán)境中，細(xì)菌表面負(fù)電荷減少，陰離子型消毒劑的殺菌效果較好；另外pH的過高或過低對(duì)微生物的生長及表面物理化學(xué)狀態(tài)均有影響。

e）有機(jī)物質(zhì)

消毒環(huán)境中存在有機(jī)物，則其可在微生物表面形成保護(hù)層阻礙消毒劑與微生物的接觸或延遲消毒劑的作用，可能導(dǎo)致微生物逐漸產(chǎn)生對(duì)藥物的適應(yīng)性，這些情況均會(huì)不同程度的降低消毒劑的消毒作用，如有機(jī)物可中和一部分消毒劑，有機(jī)物和消毒劑作用，形成溶解度比原來更低或殺菌作用比原來更弱的化合物。一般來說消毒劑中的重金屬類及表面活化劑等受有機(jī)物的影響較大。

B、其他注意點(diǎn)

a）微生物對(duì)消毒劑的耐受性

一般來說，為了避免微生物對(duì)消毒劑的耐受性，很多企業(yè)的消毒劑是輪換使用的，現(xiàn)今在學(xué)術(shù)界對(duì)于消毒劑的輪換使用的必要性尚存爭議，但FDA的監(jiān)管引文中主導(dǎo)應(yīng)進(jìn)行消毒劑輪換，但消毒劑的輪換使用周期應(yīng)以歷史環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)制訂。微生物對(duì)消毒劑的耐受性較抗生素要低一些，因?yàn)橄緞┍瓤股赜懈鼜?qiáng)的殺菌作用。另外使用高濃度的消毒劑來殺滅少量的微生物通常影響不大，因此應(yīng)考慮選擇合適的消毒劑來對(duì)抗不斷增強(qiáng)的耐受性。同時(shí)建議定期進(jìn)行試驗(yàn)證明或評(píng)估從環(huán)境菌監(jiān)測中分離出的微生物（含已知及新的類型）對(duì)該環(huán)境使用消毒劑的敏感性。

b）規(guī)范及安全使用

在消毒劑的使用過程中，人員培訓(xùn)及是否規(guī)范及安全使用該消毒劑對(duì)其應(yīng)用有很大影響。接觸消毒劑的人員要求進(jìn)行微生物、清潔滅菌操作、消毒劑的制備/使用/安全處理廢棄稀釋及濃縮消毒劑的培訓(xùn)。如正確配制消毒劑是關(guān)鍵，很多消毒效果不佳或失敗的例子源于消毒劑的過度稀釋，另外用于無菌操作流程的消毒劑必須用無菌水稀釋，一般稀釋用水推薦純化水及更高級(jí)別的水，因?yàn)樗挠捕葧?huì)影響一些消毒劑的功效。另外在處理可能產(chǎn)生有毒刺激性氣體、腐蝕性較強(qiáng)及濃度較大的消毒劑（如殺孢子劑）時(shí)，應(yīng)配備適宜的安全防護(hù)裝備，如安全眼鏡、面罩、過濾氣味的口罩、手套、防護(hù)服等。在消毒劑的使用同時(shí)應(yīng)考慮清潔劑的配合使用，清潔是去除表面顆粒及微生物、去除殘留并提高后續(xù)消毒效果，因此清潔是為后續(xù)的消毒做好準(zhǔn)備，同時(shí)規(guī)避前后2種輪換消毒劑的互相作用。

2、滅菌

1）物理滅菌法
（1）熱力滅菌法 使用熱力滅菌法，在溫度和壓力等規(guī)定的滅菌條件下，要達(dá)到一定的加熱時(shí)間。包括：①火焰滅菌法是利用火焰加熱殺滅微生物的一種方法，適用于磁制品與金屬制品及在火焰中不會(huì)破損的物品；②干熱滅菌法是利用干熱空氣殺滅微生物的一種方法，適用于耐熱、不耐濕的物品，如玻璃器材、油劑類和干粉類等；③高壓蒸汽滅菌法是利用適當(dāng)溫度和壓力的飽和水蒸氣加熱殺滅微生物的一種方法，適用于耐高溫高壓水蒸氣的物品的滅菌；④流通蒸汽滅菌法適用于有變質(zhì)危險(xiǎn)的物品；⑤煮沸滅菌法是利用沉沒在沸騰水中加熱殺滅微生物的一種方法，煮沸時(shí)間應(yīng)在15分鐘以上；⑥間歇滅菌法利用80℃～100℃水或流通水蒸氣，24小時(shí)為一周期，每隔30～60分鐘反復(fù)加熱3～5次，適用于橡膠品、培養(yǎng)基、試驗(yàn)用藥品、液體等。
（2）過濾滅菌法 過濾滅菌法是用篩除或?yàn)V材吸附等物理方式除去微生物，是一種常用的滅菌方法，適用于不能受熱的物品，如含有可溶性或不穩(wěn)定物質(zhì)的培養(yǎng)基、試驗(yàn)液體和液狀醫(yī)藥品等，過濾法的最大缺點(diǎn)是不能濾除病毒。
（3）照射滅菌法 ①放射線滅菌法是包括放射性同位素在內(nèi)，利用從放射源產(chǎn)生射線進(jìn)行照射，是殺滅微生物的一種方法，適用于玻璃制品、磁制品、金屬制品、橡膠制品、塑料制品與纖維制品等耐受放射線照射的物品；②紫外線滅菌法是利用照射紫外線殺滅微生物的一種方法，適用于玻璃制品、金屬制品、橡膠制品、塑料制品和纖維制品等，還可用于設(shè)施、設(shè)備、水或醫(yī)藥品等。

2）化學(xué)滅菌法
（1）氣體滅菌法 氣體滅菌法是利用環(huán)氧乙烷或甲醛滅殺微生物的一種方法，主要用于玻璃制品、磁制品、金屬制品、橡膠制品、塑料制品、纖維制品等，還可用于設(shè)施、設(shè)備或粉末狀的醫(yī)藥品等。使用氣體滅菌時(shí)，其被滅菌的物品以未變質(zhì)為前提條件。
（2）藥液滅菌法 通常使用的藥液有乙醇、甲酚、苯酚水或福爾馬林水等，適用于玻璃制品、磁制品、金屬制品、橡膠制品、塑料制品、纖維制品等物品，還可用于手指、無菌箱或無菌設(shè)備等。

3）高壓蒸汽滅菌法
（1）需要滅菌的各種包裹不應(yīng)過大、過緊，不要排得太密集，以免影響滅菌效果。
（2）包內(nèi)和包外各貼一條滅菌指示帶(長6～8cm)，如壓力達(dá)到范圍時(shí)，指示紙帶上即出現(xiàn)黑色條紋，表示已達(dá)滅菌的要求。
（3）易燃和易爆炸物品如碘仿、苯類等，禁用高壓蒸汽滅菌法；銳利器械如刀、剪不宜用此法滅菌，以免變鈍。
（4）瓶裝液體滅菌時(shí)，要用玻璃紙和紗布包扎瓶口，如用橡皮塞的，應(yīng)插入針頭排氣。
（5）要有專人負(fù)責(zé)，每次滅菌前，應(yīng)檢查安全閥的性能是否良好，以防鍋內(nèi)壓力過高，發(fā)生爆炸。

4）個(gè)人防護(hù)
（1）熱力滅菌 干熱滅菌時(shí)應(yīng)防止燃燒；壓力蒸汽滅菌應(yīng)防止發(fā)生爆炸事故及可能對(duì)操作人員造成的灼傷事故。
（2）紫外線、微波消毒 應(yīng)避免對(duì)人體的直接照射。
（3）氣體化學(xué)消毒劑 應(yīng)防止有毒有害消毒氣體的泄漏，經(jīng)常檢測消毒環(huán)境中該類氣體的濃度，確保在國家規(guī)定的安全范圍之內(nèi)；對(duì)環(huán)氧乙烷氣體消毒劑，還應(yīng)嚴(yán)防發(fā)生燃燒和爆炸事故。
（4）液體化學(xué)消毒劑 應(yīng)防止過敏和可能對(duì)皮膚、黏膜的損傷。
（5）處理銳利器械和用具 應(yīng)采取有效防護(hù)措施，以避免可能對(duì)人體的刺、割等傷害。

5）其他
已滅菌的物品應(yīng)做記號(hào)，以便識(shí)別，并需與未滅菌的物品分開放置，以免弄錯(cuò)。