消毒和滅菌是微生物實驗技術(shù)中最基本的操作技術(shù)，因此從事藥品生產(chǎn)、檢驗的人員均應(yīng)了解消毒和滅菌的基本概念、兩者的關(guān)系，各自的應(yīng)用方法及其意義，操作時應(yīng)嚴格執(zhí)行相關(guān)的操作規(guī)程，一方面確保生產(chǎn)與檢驗工作的效果，另一方面也是對自身安全的保護。

消毒和滅菌的概念：

1、消毒：指對病原微生物的繁殖體的致死作用，但不能殺死芽孢等全部微生物，因此消毒是不徹底的，不能代替滅菌。凡用于消毒的化學(xué)藥品稱為消毒劑，因此人們也常稱消毒劑為化學(xué)消毒劑。

2、滅菌：殺滅物體中所有活的微生物（含芽孢）的作用，滅菌是采用強烈的理化因素使任何物體內(nèi)外部的一切微生物永遠喪失其生長繁殖能力的措施。通常用物理方法來達到滅菌的目的。

二、消毒和滅菌的關(guān)系

1、共性：殺滅微生物以控制其污染和防止傳播。

2、區(qū)別：

三、消毒和滅菌的應(yīng)用

1、消毒

1）消毒劑分類

依殺滅微生物能力進行分類，有以下三種：

2）消毒劑的選擇

消毒劑的種類很多，性質(zhì)不一，因此應(yīng)根據(jù)實際需求選擇既安全又有效的消毒劑。在選擇時至少應(yīng)考慮以下幾點：

3）消毒劑的使用

A、影響消毒效果的因素

影響消毒劑效能的因素比較復(fù)雜，一般都因消毒劑的種類而異，因此各種消毒劑使用時應(yīng)注意以下因素

a）微生物種類及數(shù)量

消毒劑的有效濃度及作用時間因微生物的種類及數(shù)量的不同而有差異，不同類型的病原微生物對消毒劑的抗力不同。對于細菌繁殖體來說，革蘭氏陰性菌比革蘭氏陽性菌對消毒劑的耐受性強，尤其是銅綠假單胞菌的耐受性較強；芽孢的耐受力最強，在化學(xué)消毒劑中，戊二醛和過氧乙酸可殺滅芽孢，但其作用力不如熱力滅菌方法；病毒對消毒因子的耐力也因其種類的不同而有相當大的差異，親水病毒的耐力較親脂病毒要強；真菌對大多數(shù)化學(xué)藥物的耐受力較強，因此適用于細菌的消毒劑并不一定適用于真菌，但真菌一般耐熱性較差。微生物污染數(shù)量多時，應(yīng)加長消毒接觸時間、加大消毒劑用量或提高消毒劑濃度。

b）溫度

一般來說，消毒的速度隨溫度的提高而加快，其殺菌作用也相應(yīng)增強。溫度影響的原理是其可影響菌體表面和酶系統(tǒng)的活性，以及消毒劑的分子運動，使得消毒劑與菌細胞接觸的機會增加，從而使消毒的時間縮短。但溫度的變化對各種消毒劑的影響不同，如醇類和酚類一般受溫度影響較小，但如甲醛、環(huán)氧乙烷等溫度升高一倍時，其殺菌效果可增加十倍。

c）濃度

消毒劑的濃度應(yīng)考慮的是其主要成分的濃度，根據(jù)不同類型的消毒劑性質(zhì)，提高或降低濃度，均可顯著影響消毒效果。一般降低消毒劑的濃度需延長相應(yīng)的消毒時間，且消毒劑內(nèi)的有效成分在其保存期內(nèi)也會相應(yīng)下降。

d）pH值

酸堿度常影響酸性或堿性消毒劑的電離度，改變其溶解度及分子結(jié)構(gòu)，影響不同離子型消毒劑的作用，在堿性環(huán)境中，細菌表面負電荷增多，陽離子型消毒劑作用較強，在酸性環(huán)境中，細菌表面負電荷減少，陰離子型消毒劑的殺菌效果較好；另外pH的過高或過低對微生物的生長及表面物理化學(xué)狀態(tài)均有影響。

e）有機物質(zhì)

消毒環(huán)境中存在有機物，則其可在微生物表面形成保護層阻礙消毒劑與微生物的接觸或延遲消毒劑的作用，可能導(dǎo)致微生物逐漸產(chǎn)生對藥物的適應(yīng)性，這些情況均會不同程度的降低消毒劑的消毒作用，如有機物可中和一部分消毒劑，有機物和消毒劑作用，形成溶解度比原來更低或殺菌作用比原來更弱的化合物。一般來說消毒劑中的重金屬類及表面活化劑等受有機物的影響較大。

B、其他注意點

a）微生物對消毒劑的耐受性

一般來說，為了避免微生物對消毒劑的耐受性，很多企業(yè)的消毒劑是輪換使用的，現(xiàn)今在學(xué)術(shù)界對于消毒劑的輪換使用的必要性尚存爭議，但FDA的監(jiān)管引文中主導(dǎo)應(yīng)進行消毒劑輪換，但消毒劑的輪換使用周期應(yīng)以歷史環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)制訂。微生物對消毒劑的耐受性較抗生素要低一些，因為消毒劑比抗生素有更強的殺菌作用。另外使用高濃度的消毒劑來殺滅少量的微生物通常影響不大，因此應(yīng)考慮選擇合適的消毒劑來對抗不斷增強的耐受性。同時建議定期進行試驗證明或評估從環(huán)境菌監(jiān)測中分離出的微生物（含已知及新的類型）對該環(huán)境使用消毒劑的敏感性。

b）規(guī)范及安全使用

在消毒劑的使用過程中，人員培訓(xùn)及是否規(guī)范及安全使用該消毒劑對其應(yīng)用有很大影響。接觸消毒劑的人員要求進行微生物、清潔滅菌操作、消毒劑的制備/使用/安全處理廢棄稀釋及濃縮消毒劑的培訓(xùn)。如正確配制消毒劑是關(guān)鍵，很多消毒效果不佳或失敗的例子源于消毒劑的過度稀釋，另外用于無菌操作流程的消毒劑必須用無菌水稀釋，一般稀釋用水推薦純化水及更高級別的水，因為水的硬度會影響一些消毒劑的功效。另外在處理可能產(chǎn)生有毒刺激性氣體、腐蝕性較強及濃度較大的消毒劑（如殺孢子劑）時，應(yīng)配備適宜的安全防護裝備，如安全眼鏡、面罩、過濾氣味的口罩、手套、防護服等。在消毒劑的使用同時應(yīng)考慮清潔劑的配合使用，清潔是去除表面顆粒及微生物、去除殘留并提高后續(xù)消毒效果，因此清潔是為后續(xù)的消毒做好準備，同時規(guī)避前后2種輪換消毒劑的互相作用。

2、滅菌

1）物理滅菌法
（1）熱力滅菌法 使用熱力滅菌法，在溫度和壓力等規(guī)定的滅菌條件下，要達到一定的加熱時間。包括：①火焰滅菌法是利用火焰加熱殺滅微生物的一種方法，適用于磁制品與金屬制品及在火焰中不會破損的物品；②干熱滅菌法是利用干熱空氣殺滅微生物的一種方法，適用于耐熱、不耐濕的物品，如玻璃器材、油劑類和干粉類等；③高壓蒸汽滅菌法是利用適當溫度和壓力的飽和水蒸氣加熱殺滅微生物的一種方法，適用于耐高溫高壓水蒸氣的物品的滅菌；④流通蒸汽滅菌法適用于有變質(zhì)危險的物品；⑤煮沸滅菌法是利用沉沒在沸騰水中加熱殺滅微生物的一種方法，煮沸時間應(yīng)在15分鐘以上；⑥間歇滅菌法利用80℃～100℃水或流通水蒸氣，24小時為一周期，每隔30～60分鐘反復(fù)加熱3～5次，適用于橡膠品、培養(yǎng)基、試驗用藥品、液體等。
（2）過濾滅菌法 過濾滅菌法是用篩除或濾材吸附等物理方式除去微生物，是一種常用的滅菌方法，適用于不能受熱的物品，如含有可溶性或不穩(wěn)定物質(zhì)的培養(yǎng)基、試驗液體和液狀醫(yī)藥品等，過濾法的最大缺點是不能濾除病毒。
（3）照射滅菌法 ①放射線滅菌法是包括放射性同位素在內(nèi)，利用從放射源產(chǎn)生射線進行照射，是殺滅微生物的一種方法，適用于玻璃制品、磁制品、金屬制品、橡膠制品、塑料制品與纖維制品等耐受放射線照射的物品；②紫外線滅菌法是利用照射紫外線殺滅微生物的一種方法，適用于玻璃制品、金屬制品、橡膠制品、塑料制品和纖維制品等，還可用于設(shè)施、設(shè)備、水或醫(yī)藥品等。

2）化學(xué)滅菌法
（1）氣體滅菌法 氣體滅菌法是利用環(huán)氧乙烷或甲醛滅殺微生物的一種方法，主要用于玻璃制品、磁制品、金屬制品、橡膠制品、塑料制品、纖維制品等，還可用于設(shè)施、設(shè)備或粉末狀的醫(yī)藥品等。使用氣體滅菌時，其被滅菌的物品以未變質(zhì)為前提條件。
（2）藥液滅菌法 通常使用的藥液有乙醇、甲酚、苯酚水或福爾馬林水等，適用于玻璃制品、磁制品、金屬制品、橡膠制品、塑料制品、纖維制品等物品，還可用于手指、無菌箱或無菌設(shè)備等。

3）高壓蒸汽滅菌法
（1）需要滅菌的各種包裹不應(yīng)過大、過緊，不要排得太密集，以免影響滅菌效果。
（2）包內(nèi)和包外各貼一條滅菌指示帶(長6～8cm)，如壓力達到范圍時，指示紙帶上即出現(xiàn)黑色條紋，表示已達滅菌的要求。
（3）易燃和易爆炸物品如碘仿、苯類等，禁用高壓蒸汽滅菌法；銳利器械如刀、剪不宜用此法滅菌，以免變鈍。
（4）瓶裝液體滅菌時，要用玻璃紙和紗布包扎瓶口，如用橡皮塞的，應(yīng)插入針頭排氣。
（5）要有專人負責(zé)，每次滅菌前，應(yīng)檢查安全閥的性能是否良好，以防鍋內(nèi)壓力過高，發(fā)生爆炸。

4）個人防護
（1）熱力滅菌 干熱滅菌時應(yīng)防止燃燒；壓力蒸汽滅菌應(yīng)防止發(fā)生爆炸事故及可能對操作人員造成的灼傷事故。
（2）紫外線、微波消毒 應(yīng)避免對人體的直接照射。
（3）氣體化學(xué)消毒劑 應(yīng)防止有毒有害消毒氣體的泄漏，經(jīng)常檢測消毒環(huán)境中該類氣體的濃度，確保在國家規(guī)定的安全范圍之內(nèi)；對環(huán)氧乙烷氣體消毒劑，還應(yīng)嚴防發(fā)生燃燒和爆炸事故。
（4）液體化學(xué)消毒劑 應(yīng)防止過敏和可能對皮膚、黏膜的損傷。
（5）處理銳利器械和用具 應(yīng)采取有效防護措施，以避免可能對人體的刺、割等傷害。

5）其他
已滅菌的物品應(yīng)做記號，以便識別，并需與未滅菌的物品分開放置，以免弄錯。